外包服務(wù) Tunel
簡要描述:外包服務(wù) Tunel冰凍切片tunel實(shí)驗(yàn)步驟1、 冰凍切片固定:冰凍切片從冰箱拿出來復(fù)溫,晾干水分,冷丙酮固定10min,待丙酮*干后于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。2、 修復(fù):切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止液體流走),在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K儲(chǔ)存液用PBS 1:9稀釋)覆蓋組織,37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS(PH7.
- 產(chǎn)品型號(hào):茁彩生物
- 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間:2024-09-29
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外包服務(wù) Tunel
冰凍切片tunel實(shí)驗(yàn)步驟
1、 冰凍切片固定:冰凍切片從冰箱拿出來復(fù)溫,晾干水分,冷丙酮固定10min,待丙酮*干后于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
2、 修復(fù):切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止液體流走),在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K儲(chǔ)存液用PBS 1:9稀釋)覆蓋組織,37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
3、 破膜:切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織,常溫下孵育20min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
4、 加試劑1,2:按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合(試劑1,2為現(xiàn)配現(xiàn)用),加到圈內(nèi)覆蓋組織,切片平放于濕盒內(nèi),37℃恒溫孵育2小時(shí),濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。
5、 阻斷內(nèi)源性過氧.化物酶:將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片放入用甲醇配制的3%過氧.化氫溶液(過.氧化氫:甲醇=1:9)室溫避光孵育15 min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
6、 加試劑3:切片稍甩干后,每張切片加適量試劑3(converter-POD)覆蓋組織,切片平放于濕盒內(nèi),37℃溫箱孵育30min。將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
7、 DAB顯色:切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下控制顯色時(shí)間,陽性為細(xì)胞核呈棕黃色,自來水沖洗切片終止顯色。
8、 復(fù)染細(xì)胞核:Harris蘇木素復(fù)染3min左右,自來水洗,1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來水沖洗,氨水返藍(lán),流水沖洗。
9、 脫水封片:將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --無水乙醇Ⅰ6min -無水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脫水透明,將切片從二甲苯拿出來稍晾干,中性樹膠封片。
石蠟切片tunel實(shí)驗(yàn)步驟
1、 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。(冬天適當(dāng)延長脫蠟時(shí)間)
2、 修復(fù):切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止液體流走),在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K儲(chǔ)存液用PBS 1:9稀釋)覆蓋組織,37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
3、 破膜:切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織,常溫下孵育20min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
4、 加試劑1,2:按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合(試劑1,2為現(xiàn)配現(xiàn)用),加到圈內(nèi)覆蓋組織,切片平放于濕盒內(nèi),37℃恒溫孵育2小時(shí),濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。
5、 阻斷內(nèi)源性過氧.化物酶:將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片放入用甲醇配制的3%過氧化氫.溶液(過氧.化氫:甲醇=1:9)室溫避光孵育15 min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
6、 加試劑3:切片稍甩干后,每張切片加適量試劑3(converter-POD)覆蓋組織,切片平放于濕盒內(nèi),37℃溫箱孵育30min。將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
7、 DAB顯色:切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下控制顯色時(shí)間,陽性為細(xì)胞核呈棕黃色,自來水沖洗切片終止顯色。
8、 復(fù)染細(xì)胞核:Harris蘇木素復(fù)染3min左右,自來水洗,1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來水沖洗,氨水返藍(lán),流水沖洗。
9、 脫水封片:將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --無水乙醇Ⅰ6min -無水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脫水透明,將切片從二甲苯拿出來稍晾干,中性樹膠封片。
上海茁彩生物科技有限公司,可以承接諸多病理實(shí)驗(yàn),樣本不僅含有基礎(chǔ)的動(dòng)物組織切片,還包括植物葉片、動(dòng)物細(xì)胞、骨片、腦片、皮膚等特殊樣本。染色種類多,染色方法全.石蠟染色,冰切染色均可操作,同時(shí)還可以承接整體實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,包括樣本的造模,細(xì)胞的培養(yǎng),以及后續(xù)細(xì)胞的增殖、細(xì)胞粘附、細(xì)胞劃痕等實(shí)驗(yàn).