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WB(核蛋白)檢測服務(wù)

簡要描述:WB(核蛋白)檢測服務(wù),印跡法(Blotting)是指將樣品轉(zhuǎn)移到固相載體上,而后利用相應(yīng)的探測反應(yīng)來檢測樣品的一種方法。Western Blot是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。

  • 產(chǎn)品型號:茁彩生物
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-09-29
  • 訪  問  量:1746
詳情介紹


WB(核蛋白)檢測服務(wù)實(shí)驗(yàn)收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn):

項(xiàng)目編號項(xiàng)目名稱計(jì)價(jià)單位單價(jià)

ZC1103

WB(核蛋白、線粒體蛋白、膜蛋白)

個(gè)180元


服務(wù)介紹:

      印跡法(Blotting)是指將樣品轉(zhuǎn)移到固相載體上,而后利用相應(yīng)的探測反應(yīng)來檢測樣品的一種方法。Western Blot是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。


實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示:


WB(核蛋白)檢測服務(wù)

WB(核蛋白)檢測服務(wù)注意事項(xiàng)

      蛋白樣品制備的注意事項(xiàng):

       1、細(xì)胞數(shù)量達(dá)5×106

       2、將細(xì)胞裂解液再離心,收集上清液,加loading煮樣5min。

      SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳注意事項(xiàng):

      1、做膠:防止漏膠、進(jìn)氣泡以及花膠(水封、插梳子和拔梳子)

      2、加樣:兩邊加loading,加樣量一樣,加樣時(shí)間要盡量短,以免樣品擴(kuò)散。

      3、電泳:將膠夾好放于電泳槽中,加電泳buffer(內(nèi)外面不能聯(lián)通),將電壓調(diào)到90V開始電泳。

      轉(zhuǎn)膜注意事項(xiàng):

       1、泡膜:轉(zhuǎn)膜之前將海綿、膠、膜都用預(yù)冷的轉(zhuǎn)移buffer浸泡20min。(1.凝膠若是沒在預(yù)冷的轉(zhuǎn)膜buffer中浸泡,就會在轉(zhuǎn)膜過程中出現(xiàn)凝膠皺縮,導(dǎo)致出現(xiàn)轉(zhuǎn)移條帶變形。2.PVDF膜具有疏水性,需用甲醇浸泡)

      2、轉(zhuǎn)膜順序:陰極碳板+海綿+三濾+膠+膜+三濾+海綿+陽極碳板

      3、轉(zhuǎn)膜條件:0.35A 250V 1h40min 冰浴中進(jìn)行轉(zhuǎn)膜(具體轉(zhuǎn)膜時(shí)間要根據(jù)目的蛋白的大小而定;目的蛋白的分子量越大,需要的轉(zhuǎn)膜時(shí)間越長,反之則短)

      4、避免直接用手碰雜交膜,使用鑷子。因?yàn)槭稚系牡鞍缀陀椭瑫绊戅D(zhuǎn)膜效率并會使膜臟掉。

      5、夾好膜和凝膠后,確定在凝膠/膜和濾紙之間沒有氣泡存在,否則會導(dǎo)致轉(zhuǎn)膜不*。

      6、保證膜和濾紙的大小和凝膠*一樣,過大和過小都會影響轉(zhuǎn)膜效率。

      7、雞來源的抗體與PVDF和尼龍膜有較強(qiáng)的結(jié)合能力,從而產(chǎn)生較高的背景,故如果選擇雞來源的抗體最好使用硝酸纖維素膜(NC膜)

      關(guān)于磷酸化蛋白檢測的注意事項(xiàng):

      1、保持待測蛋白處于磷酸化狀態(tài)!在標(biāo)本提取液中加入足夠的磷酸酶抑制劑(NaF,可以防止去磷酸化),并將標(biāo)本時(shí)刻保持在冰浴中!

      2、使用5%的BSA作為封閉試劑!不能使用脫脂奶粉!(因?yàn)槊撝谭壑泻欣业鞍祝瑫霈F(xiàn)很高的背景)。

     抗體保存注意事項(xiàng):

     1、收到抗體后按要求離心后再打開管蓋進(jìn)行分裝盒保存!

     2、對于大部分抗體,比較合適的保存方式是分裝后保存在-20℃

   ①分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好,最少不能少于10μl每份。因?yàn)榉盅b體積越小,抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。

   ② 復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4℃,避免再凍起來!

    絕對避免將抗體保存在自動(dòng)除霜冰箱中。

    3、大部分抗體收到后4℃短暫保存1-2周對抗體活性是沒有影響的。







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