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土壤中磷脂脂肪酸(PLFA)的測定

發布時間: 2024-07-03  點擊次數: 365次

PLFAs是幾乎所有活體細胞膜的主要成分,周轉速率極快且隨細胞死亡而迅速降解,脂肪酸結構與種類多樣,對環境因素敏感,分析結果重復性較好。既可用簡單試劑和設備測定由PLFAs轉化的磷酸鹽以確定微生物總量,也可以根據不同菌群的特定脂肪酸C鏈長度、飽和度及羥基等取代基位置差異研究特殊功能菌群。在微生物定量及活力測定方面,PLFAs與微生物量C、底物誘導呼吸(SIR)及ATP等測定方法所得結果十分吻合。因此,PLFAs在土壤微生物學研究中很有潛力。

磷脂脂肪酸在土壤中的功能主要包括以下幾個方面:

(1)作為細胞膜的組成成分,參與微生物的細胞結構和功能。

(2)可以作為能源來源,供給微生物進行代謝和生長。

(3)參與土壤中的有機質的分解和循環過程。

(4)對土壤中的酶活性和微生物群落結構具有調節作用。

實驗步驟

(1)稱3 g土壤與15 ml 0.2M甲醇化的KOH混勻,放入離心管中。

(2)在37℃培養1 h,每10 min漩渦震蕩一次。

(3)加入3 ml 1.0 M冰醋酸10 ml正己烷,分層。

(4)4800 r離心15 min。

(5)取上清移至試管,在氮氣下吹干。

(6)將試管內磷脂脂肪酸溶解于0.5 ml 1:1甲基叔丁基醚:正己烷,轉移到氣質聯用色譜分析用小管待分析。

將處理好的樣品用Agilent 6890GC / 5973 MS氣質聯用儀進行分析,參數設定如下:

色譜柱:利用處理后的石英毛細管柱(0.25 mm×30 nm×0.25 um)。

樣口溫度為250℃,不分流進樣。

采用恒流模式,流速為0.8 ml/min,載氣為高純氦氣。

程序升溫:80℃(保持2 min),以50°C/min的速度升至150 ℃(保持2 min),以2.5°C/min的速度升至195°C(保持3 min),再以2.5°C/min的速度升至240℃(保持5 min)。

電離方式:EI(70eV)

離子源溫度:150 ℃

四極桿溫度:230 ℃

接口溫度:280 ℃

掃描方式:SIM

C14:0是外標物

磷脂脂肪酸含量計算公式

PLFA(nmol/g土樣)=(PPLFA × S × V)/(POSTD × D × R × W)

式中PPLFA和POSTD分別是樣品和標準物質的峰值面積,s為外標標準物質的濃度(ng·ul-1),V為樣品的測定體積(ul),R為分取倍數,D為稀釋倍數,W為烘干土質量(g)。



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